Obecně se také nazývají chloroformáty (oxycarbonylchloridy). 9-Fluorenyl-methyloxycarbonyl chlorid (FMOC-Cl) reaguje jak s primárními tak sekundárními aminokyselinami podle uvedeného schématu za vzniku fluoreskujících derivátů s excitačním maximem při 263 nm a emisním maximem 313 nm a používá se výhradně k derivatizaci před kolonou.[i] Reakce probíhá v borátovém pufru při pH 7,7 aby nedocházelo k reakci s fenoly nebo alkoholy. Nevýhodou FMOC-Cl je, že se používá ve velkém nadbytku, který musí být odstraněn v následném extrakčním kroku pentanem[ii],[iii] nebo musí být nadbytek odstraněn reakcí s hydrofóbními (nepolárními) aminy jako např. adamantamin nebo octylamin.[iv] Je fakt, že při použití pentanu jako extrakčního činidla v několikastupňové extrakci nadbytku činidla zavádí další chyby, prodlužuje se doba analýzy a snižuje se reprodukovatelnost metody. Naproti tomu odstranění nadbytku činidla nepolárními aminy zavádí do derivatizační procedury jediný krok navíc a neprodlužuje podstatně dobu analýzy. Poněkud problematická je reakce histidinu, který může poskytovat mono- nebo disubstituované deriváty. Deriváty jsou stabilní za pokojové teploty a za přístupu světla alespoň dva týdny.
Příprava 2-naftyloxycarbonylchloridu byla popsána.[v] NCF-Cl reaguje s terciárními aminy za přítomnosti uhličitanu draselného v benzenu v uzavřené vialce při teplotě 100 °C po dobu 1 hodiny. Aminy se podléhají za těchto podmínek dealkylaci a vznikají fluorescenční deriváty ve vysokém výtěžku.[vi] Tyto deriváty jsou vhodné pro chromatografickou separaci, excitační vlnová délka derivátů je 275 nm, emisní vlnová délka 335 nm s detekčním limitem řádově pmol.
[i] Einarsson S.B., Josefsson B. and Lagerkvist S.: J. Chromatogr. 282, 609 (1983).
[ii] Einarsson S.: J. Chromatogr. 348, 213 (1985).
[iii] Betnér I., Földi P.: Chromatographia 22, 381 (1986).
[iv] Gustavsson B., Betnér j.: J.Chromatogr. 507, 67 (1990).
[v] Raiford L.C., Inman G.O.: J. Am. Chem. Soc. 56, 1586 (1934).
[vi] Gübitz G., Wintersteiger R., Hartinger A.: J. Chromatogr. 218, 51 (1981).
