Derivatizace v HPLC

1.4 Činidla pro karbonylskupinu

Samotná karbonylová skupina se chová jako chromofor s absorpčním maximem vyšším než 225 nm (aceton l_max = 270 nm), ale absorpční koeficient karbonylové skupiny je velmi nízký. Aldehydy a ketony reagují se substituovanými hydraziny a hydroxylaminy na příslušné deriváty absorbující v UV oblasti spektra. Jedná se o kysele katalyzovanou nukleofilní adici na karbonylovou skupinu. Při kyselé katalýze vzroste polarita vazby >C=O v protických rozpouštědlech, za přítomnosti kyseliny může dojít k úplné protonaci karbonylu:

>C=O⁽⁺⁾-H® >C⁽⁺⁾-OH

2,4-dinitrofenylhydrazin(DNPH)

Ketony a aldehydy reagují s 2,4-dinitroafenylhydrazinem na příslušné 2,4-dinitrofenylhydrazony. Tvorba hydrazonů probíhá v kyselém prostředí a separace derivátů probíhá jak na normální^[1] tak reverzní fázi.^[2]

p-Nitrobenzylhydroxylamin (NBHA)

Aldehydy a ketony reagují s p-nitrobenzylhydroxylaminem na příslušné oximy a takto byl použitý ke stanovení prostaglandinu v biologickém materiálu. Karboxylová skupina byla nejprve eliminována esterifikací diazomethanem a po odpaření nadbytku reakčního činidla byla ketoskupina derivatizována v pyridinu nadbytkem p-nitrobenzylhydroxylaminu.^[3] Reakce proběhne kvantitativně za 2 hodiny při teplotě 40 °C nebo za laboratorní teploty přes noc. Detekční limit je 25 ng.

Literatura

[1] Carey M.A., Persinger A.F.: J. Chromatogr. Sci. 10, 537 (1972).

[2] Fitzpatrick F.A., Siggia S., Dingham J.: Anal. Chem. 44, 2211 (1972).

[3] Fitzpatrick F.A., Wynalda M.A., Kaiser D.G.: Anal. Chem. 49, 1032 (1989).

Last modified: