ELSD - DETEKTOR
Evaporative Light Scattering HPLC Detector (ELSD) především slouží k detekci látek, které ve své molekule neobsahují žádný chromofor nebo fluorofor. Jako příklad je možné uvést detekci fosfolipidů, mastných kyselin, makromolekul, sacharidů, aminokyselin aj. ELS detektor je univerzální detektor u něhož můžeme použít na rozdíl od refraktometrického detektoru gradientovou eluci.
Princip ELS detektoru je patrný z obrázku:
|
Při vstupu eluentu (mobilní fáze, 1) do zmlžovače (4) dojde k jeho zmlžení inertním plynem (dusíkem o rychlosti 0,4 až 1,5 l/min, 2). Zmlžený eluent vstupuje do evaporační komůrky (6) kde dojde k odpaření mobilní fáze a vytvoření částeček méně těkavého solutu. Ve zmlžovači dochází ke kondenzaci eluentu, který je odváděn odpadním výfukem (odpad eluentu, 3) ze zmlžovače, což je výhodné zejména při vyšších průtocích mobilní fáze. Z tohoto důvodu se musí používat mobilní fáze s aditivy, které jsou dobře těkavé (obdobně jako v technice LC-MS), např. octan amonný, hydroxid amonný, kyselina mravenčí nebo octová, pentylamin. Zmlžený eluent se solutem (5 dopadá do evaporační komůrky ve které nesmí docházet k rozptýlení solutu, aby eluující píky byly ostré. V optické komůrce (7) dojde k rozptylu světla pocházejícího ze zdroje záření (8) na částečkách solutu a odezva fotodetektoru (9) je přímo úměrná hmotě solutu procházející optickým paprskem.
Odezva detektoru odpovídá všem přítomným netěkavým solutům, jinak řečeno odezva detektoru by měla být úměrná hmotnosti přítomných solutů. Aby byl lineární dynamický rozsah detektoru co největší, musí se velikost solvatovaných částeček solutu kontrolovat a měla by být jednotná (desolvatace). Velikost částeček solutu určuje, jak se dopadající světlo rozptýlí. Tvorba kapiček solutu v nebulizéru a jejich velikost v zuávislosti na složení mobilní fáze je možné s určitou mírou predikovat - závisí na průtoku mobilní fáze, viskozitě a hustotě mobilní fáze.[1] Rozptyl světla se pak měří v takovém úhlu od excitujícího paprsku, aby byly co nejvíce eliminována polarizační efekty. Linearita detektoru závisí tudíž také na fyzikálně chemických vlastnostech solutu. Obecně je linearita ELS detektoru daleko nižší než detektoru UV. Protože musí být mobilní fáze těkavější než soluty, což vyplývá z principu ELSD, jsou na mobilní fázi kladeny určité limitující požadavky - měly by se používat pokud možno takové pufry, které velmi snadno těkají (mravenčany, octany, amoniak) obdobně jako při detekci MS. Detektor ELS je citlivý k použité mobilní fázi, použitá mobilní fáze významně ovlivňuje šum detektoru (vysoká kvalita HPLC solventů ale i stacionární fáze - vymývání (krvácení) stacionární fáze). Technika ELS je technikou destruktivní a proto musí být detektor zařazen jako poslední detektor v sérii.
Výhodou detektoru je, že je detektorem univerzálním, především slouží k detekci látek, které ve své molekule neobsahují žádný chromofor nebo fluorofor. Je možné použít gradientovou eluci (omezena vzhledem k tomu, že změna složení mobilní fáze má vliv na velikost částeček solutu a jejich odpařování).
[1] S. Nukiyama, Y Tanasawa,. Trans Soc. Mech. Eng. Tokyo 4, 86. (1938).
Last modified: