rozlišení (délka kolony)  šířku píku (délka kolony)  dobu analýzy (délka kolony)

mez stanovitelnosti (vnitřní průměr kolony)  tlakový spád na koloně (vnitřní průměr kolony)

objemový průtok mobilní fáze (vnitřní průměr kolony)

Rozlišení R_1,2

Účinnost kolony je úměrná čtverci délky kolony:

a se zvyšující se délkou kolony L roste účinnost kolony a současně i rozlišení:

Šířka píku

Pro šířku píku můžeme napsat:

zkracující se délkou kolony L klesá šířka píku Y_Va zvyšuje se mez stanovitelnosti citlivost).

Doba analýzy t_a

Pro dobu analýzy platí:

Doba analýzy t_a klesá:

s klesajícími rozměry kolony (L,r)

se zvyšujícím se objemovým průtokem F_m

snižujícím se kapacitním poměrem k_max (zvyšující se eluční silou mobilní fáze).

Zkrácením délky kolony L:

zvýší se mez stanovitelnosti; citlivost

zkrátí se doba analýzy t_a (sníží se spotřeba rozpouštědel)

sníží se tlakový spád na koloně Dp (teplotní gradient DT)

sníží se účinnost kolony n a rozlišení R_1,2

Mez stanovitelnosti

Absolutní mez stanovitelnosti můžeme vyjádřit jako zředění látky Z, ke kterému dojde během chromatografického procesu:

Zředění látky Z se vyjádří jako poměr šířky elučního píku (v objemových jednotkách) Y_V, k původnímu objemu vzorku V_I.

Zředění vzorku Z se potlačí:

zvýšením účinnosti kolony n (použití náplní s malým zrněním, zvýšením eluční síly mobilní fáze)

zmenšením rozměrů kolony (to je její délky L a vnitřního průměru r) - toto je však na úkor snížení účinnosti kolony n

zvětšením nástřiku vzorku V_I

Tlakový spád

Pro tlakový spád platí

Při konstantní objemové rychlosti toku mobilní fáze Fm je tlakový spád na koloně Dp přímo úměrný délce kolony L a viskozitě mobilní fáze h a nepřímo úměrný čtverci průměru částeček náplně d_p a čtverci vnitřního průměru kolony r². Tlakový spád na koloně Dp bezprostředně souvisí s teplotním gradientem DT, který může na koloně vznikat průchodem mobilní fáze kolonou:

Objemový průtok

Při zachování stejné střední lineární rychlosti mobilní fáze (u) je podle definice nutné snížit objemový průtok F m a to v poměru čtverců průměru kolony:

Snížením průměru kolony r ze 4,6 mm na 2,1mm se musí snížit objemový průtok asi 4,8 krát tj. z 1000 µl/min na 200 µl/min. Průtoky mobilní fáze se pak pohybují okolo 100 µl/min - dochází snížení spotřeby rozpouštědel.

Při zachování stejné účinnosti kolony n se objem pórů sorbentu snižuje v poměru čtverců průměru kolony r². To znamená i ve stejném poměru snížit dávkování vzorku na kolonu  V_I (možnost přetížení kolony.

Zmenšením průměru kolony r:

sníží se mez stanovitelnosti

sníží se spotřeba rozpouštědel

zvýší se tlakový spád na koloně Dp

zvýší se nároky na instrumentaci

zvýší se možnost přetížení kolony

Související odkazy:

vliv teploty na eluční charakteistiku

vliv složení mobilní fáze na eluční charakteristiku

mez detekce a mez stanovitelnosti

vliv pH mobilní fáze na retenci solutůi

vliv složení mobilní fáze na retenci solutů

[Top of Page]

Last modified: